شکل ۴۸: نمودارهای مربوط به اثر دناتوراسیون شیمیایی بر شدت نشر ناحیه‏ی تیروزین کینازی پروتئین نوترکیب FGFR2b با بهره گرفتن از روش فلوئورسانس ذاتی. نمودارها کاهش شدت فلوئورسانس ذاتی را در حضور افزایش تدریجی غلظت گوانیدین هیدروکلراید نشان می دهند. الف) سرب ۵۰۰ میکرومولار، ب) کادمیوم ۱۲ میلی مولار، ج) آلومینیوم ۱ مولار و د) نیکل ۱۰۰ میلی مولار می باشد.
۴-۱۰- بررسی اثر سرب، کادمیوم، آلومینیوم و نیکل، بر روی ساختار دوم ناحیه‏ی تیروزین کینازی پروتئین نوترکیب FGFR2b
به منظور بررسی اثر فلزات سمی سرب، کادمیوم، نیکل و آلومینیوم روی ساختار دوم ناحیه‏ی تیروزین کینازی پروتئین نوترکیب FGFR2b از روش Far-UV-CD و FTIR استفاده شد. در CD، نقطه مدنظرnm 222 بود چرا که این نقطه بهترین نمایه آلفا هلیکس می باشد، که در سه فلز کادمیوم، نیکل و آلومینیوم در مقایسه با نمودار نیتیو، این نقطه در تمام موارد روی هم قرار گرفت. پس از بدست آوردن نمودارهای مربوطه و نیز آنالیز آن ها با کمک نرم افزار مخصوص CD و FTIR، داده های مربوط به ساختار دوم ناحیه ی تیروزین کینازی در شکل ۴۹ و ۵۰ نشان داده شده اند، نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که ساختار دوم ناحیه ی کینازی مورد مطالعه ما، فقط در حضور سرب تغییر قابل توجهی نشان می دهد. سرب در دستگاه CDایجاد نویز کرد و نمودار قابل رسم نبود.
الف)
ب)
ج)
شکل ۴۹: طیف Far-UV-CD. مربوط به ناحیه‏ی تیروزین کینازی پروتئین نوترکیب FGFR2b.
طیف دورنگ نمایی حلقوی از نمونه پروتئینی موجود در بافر حاوی ۲۵ میلی مولار Tris-Hcl و ۱۰۰ میلی مولار NaCl با PH برابر ۵/۷ در دمای اتاق بدست آمد. شکل الف، ب و ج، به ترتیب نشان دهنده ی طیف دورنگ نمایی حلقوی مربوط به ناحیه ی کینازی در حضور غلظت ۳،۰ و ۶ مولارگوانیدیوم هیدروکلراید است. همچنین در تمام اشکال، نیکل ۱۰ میلی مولار، کادمیوم ۶ میلی مولار و آلومینیوم ۵/۰ مولار است. نقطه nm222 در این فلزات با نیتیو یکسان است که نشان دهنده عدم تغییر ساختار پروتئین می باشد.
الف)
ب)
ج)
د)
شکل ۵۰: در ساختار پلی پپتیدها و پروتئین ها، با توجه به ساختار و زنجیره جانبی، ۹ حالت نرمال برای آمید پروتئین ها مجاز است که شامل: A,B,I … VII می باشد.

حساسترین ناحیه طیفی ساختار دوم پروتئین، آمید ۱ است که مربوط به گروه کربونیل می باشد.
FTIR برای تایید اثر سرب بر ساختار FGFR2b. نیتیو بدون سرب (الف)، سرب ۳۰۰ میکرومولار (ب)، سرب ۵۰۰ میکرومولار (ج) و (د): نیتیو (سیاه)، سرب ۳۰۰ میکرومولار (آبی)، سرب ۵۰۰ میکرومولار (قرمز). تغییرات مربوط به گروه کربونیل(که جهت تغییر ساختار پروتئین ها بسیار اهمیت دارد)، تیول و N-H قابل مشاهده می باشد.
فصل پنجم
بحث و نتیجه گیری